自從1998年以來(lái)，作為單光子計(jì)數(shù)設(shè)備的技術(shù)優(yōu)秀廠商，Becker&Hickl GmbH提供各種用于激光掃描共聚焦顯微鏡的高級(jí)FLIM系統(tǒng)。熒光壽命成像顯微技術(shù)已在生命科學(xué)，臨床熒光壽命領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用。成像，擴(kuò)散光學(xué)層析成像，熒光相關(guān)光譜等等。使用我們專(zhuān)有的多維時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)技術(shù)（TCSPC），我們的FLIM和TCSPC系統(tǒng)具有超高光子效率的特點(diǎn)。因此，科學(xué)家，醫(yī)生，研究人員和其他用戶(hù)能夠進(jìn)行TCSPC FLIM顯微鏡檢查，多波長(zhǎng)FLIM，同時(shí)FLIM和快速獲取FLIM。從FLIM系統(tǒng)中進(jìn)行選擇，以升級(jí)一臺(tái)光子和多光子顯微鏡，以進(jìn)行共聚焦或非解掃檢測(cè)。

熒光壽命成像顯微鏡的應(yīng)用

生命科學(xué)是我們熒光壽命成像顯微鏡（FLIM）設(shè)備的主要應(yīng)用領(lǐng)域。我們的技術(shù)經(jīng)常用于以下領(lǐng)域：

  • 分子影像學(xué)
  • 代謝成像
  • FRET成像
  • 同時(shí)進(jìn)行NAD(P)H和pO2成像

同樣，使用這種方法可以評(píng)估快速的生理效應(yīng)以及受激發(fā)射損耗（STED）顯微鏡。

大多數(shù)熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其微環(huán)境及其與之的相互作用。分子環(huán)境參數(shù)（例如pH值，氧氣濃度，生理上重要的離子或蛋白質(zhì)）的測(cè)量對(duì)于評(píng)估熒光壽命和觀察到的熒光團(tuán)的強(qiáng)度至關(guān)重要。無(wú)論是使用pH敏感的熒光探針觀察樣品的熒光壽命，還是通過(guò)F?rster共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用實(shí)驗(yàn)，還是測(cè)量細(xì)胞中Ca2 +濃度的方法：出色的圖像和時(shí)間分辨率都是關(guān)鍵。通過(guò)我們的FLIM解決方案來(lái)升級(jí)您現(xiàn)有的共聚焦顯微鏡或雙光子顯微鏡，研究人員和科學(xué)家能夠在分子水平上對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行許多高精度測(cè)量分析。

基于FLIM的體內(nèi)成像和更多臨床應(yīng)用

熒光壽命成像（FLIM）的方法特別適合于體內(nèi)診斷，因?yàn)樗鼈兪菬o(wú)創(chuàng)且無(wú)損的。因此，它們被廣泛用于活體受試者的臨床研究和醫(yī)學(xué)檢查。例如，該技術(shù)可以用于以下領(lǐng)域：

  • 皮膚的體內(nèi)診斷：人類(lèi)皮膚的多光子擴(kuò)散層析成像結(jié)合了雙光子激發(fā)和非解掃檢測(cè)，因此，多光子FLIM可以提供組織層的光學(xué)切片圖像，深度可達(dá)100 μm。人皮膚細(xì)胞的體內(nèi)雙光子成像是可能的，而不會(huì)損害組織的活力，可以從亞細(xì)胞分辨率重建三維結(jié)構(gòu)。
  • 眼科檢查：眼科FLIM結(jié)合了快速光束掃描和皮秒二極管激光器激發(fā)的功能。該方法非常靈敏，可以記錄人眼眼底（背景）的壽命圖像。通過(guò)這種方式，有可能及早發(fā)現(xiàn)眼部疾病，因?yàn)檫@些疾病通常伴隨著眼底的代謝變化。反過(guò)來(lái)，這些引起內(nèi)源性熒光團(tuán)的熒光衰減參數(shù)的變化。
  • 個(gè)性化化療：要針對(duì)患者所患的特殊癌癥，找到最有效的抗癌藥物至關(guān)重要。但是，癌細(xì)胞對(duì)不同類(lèi)型藥物的反應(yīng)并不是完全可預(yù)測(cè)的。因此，進(jìn)行活檢，將細(xì)胞培養(yǎng)并用不同的藥物處理。同時(shí)，它們被FLIM重復(fù)成像。熒光壽命表明治療后細(xì)胞代謝狀態(tài)的早期改變。因此，通過(guò)這些測(cè)量，僅需幾天即可確定最有效的藥物。

將時(shí)域分析與相量圖相結(jié)合

BH新一代的FLIM數(shù)據(jù)分析軟件將時(shí)域多指數(shù)衰減分析與相量圖相結(jié)合。時(shí)域中熒光衰減的測(cè)量需要短的激發(fā)脈沖和快速的檢測(cè)電路。樣品中的每個(gè)點(diǎn)都被依次激勵(lì)。使用時(shí)域方法，壽命是從對(duì)衰減數(shù)據(jù)的指數(shù)擬合得出的。

典型的FLIM方法包括從感興趣區(qū)域（ROI）的共焦圖像中提取1-，2-或3-衰減時(shí)間。限制熒光團(tuán)的衰減速率可能是任意的，而且很復(fù)雜，因?yàn)樵诩?xì)胞環(huán)境中存在幾種衰減速率。對(duì)于相量圖，關(guān)于選擇哪種衰減模型以及評(píng)估擬合優(yōu)度的挑戰(zhàn)性決定已成為過(guò)去。在相量圖中，所有原始FLIM數(shù)據(jù)在向量空間中均表示為相位和幅度。圖像中的每個(gè)像素都轉(zhuǎn)換為相量圖中的一個(gè)點(diǎn)。獨(dú)立于其在圖像中的位置，具有相似衰減特征的像素在相量圖中形成群集?？梢栽诖岁嚵兄羞x擇不同的相量簇，并在標(biāo)注中反向注釋對(duì)應(yīng)的像素。時(shí)域FLIM圖片。

此外，可以將所選相量范圍內(nèi)的像素的衰減函數(shù)組合為大量光子的單個(gè)衰減曲線?？梢愿呔鹊胤治鲈撉€，揭示正常像素逐像素分析不可見(jiàn)的衰減分量。

BH的SPCImage FLIM數(shù)據(jù)分析軟件使用最大似然算法來(lái)計(jì)算單個(gè)像素中的衰減函數(shù)的參數(shù)，并通過(guò)GPU處理分析過(guò)程來(lái)加速。1D和2D參數(shù)直方圖可用于顯示圖像像素或可選ROI上所有所需參數(shù)的分布。

滿足您所有FLIM需求的優(yōu)秀技術(shù)

從我們完整的高級(jí)FLIM系統(tǒng)或?yàn)槟F(xiàn)有的顯微鏡進(jìn)行的多功能升級(jí)中選擇適合您的實(shí)驗(yàn)室或診所的理想設(shè)備。您需要有關(guān)哪種解決方案最適合您所需應(yīng)用程序的更多信息？可通過(guò)郵件或電話聯(lián)系我們，獲取更多信息。